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  本サービスではLuminex200システムを用いています。このシステムは米国Luminex社のLuminexシステムとxMAP（Multiple Analyte Profiling）テクノロジーを基盤とする技術です。ターゲットタンパク質に特異的結合する抗体と結合したLuminex®ビーズを液相でターゲット抗原に反応させます。このビーズは 蛍光色素で着色されており最大100種類の抗体を区別することが可能です。さらに、抗原タンパク質に対する別の抗体と蛍光標識（ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-PE）した二次抗体を反応させ、ビーズ-抗体-ターゲットタンパク質複合体を形成させます。フローメトリーによってLuminex®ビーズを1粒づつ流しながら、赤色レーザとAPDセンサでビーズの直径と色を測定し、緑色レーザと光電子増倍管でビーズ表面の蛍光量を測定します。このｘMAP技術を用いることで、サンプル中の解析対象である各抗原を同時に定量することが 可能となります。計測後、標準溶液の蛍光強度とタンパク質濃度から標準曲線を作成し、複数のターゲットタンパク質について濃度を関数式から換算します。２色の蛍光色素の配合比率を変え着色されたポリスチレン製ビーズに、対象に特異的な 抗体を結合しており、サンプル中のターゲットタンパク質と反応させ、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジン-PEで蛍光ラベリングします。

1．解析システム：Luminex200

※Luminex社

2．解析キット：Milliplex^TM　(MILLIPORE社)

MilliplexTMは、サイトカイン、ケモカイン、アディポカイン、エンドクリンなど、数十種類の液性因子タンパク質の定量に特化した優れた製品です。

                       

                ※日本ミリポア株式会社

 

※MILLIPORE社以外の試薬でも測定可能です。

・Procarta Assay kit (Panomics/Affimetrix)

・WideScreen Assay kit (Novagen/Merck)

・Multiplex Antibody kit (BioSource/Invitrogen)

3．解析ソフト：DNASIS®Plex version 2.5 (日立ソフトウェアエンジニアリング株式会社)

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【原理】

（1）2種類の蛍光色素の量比を変え色分けされたビーズが最大で100種類あります。

（2）1種類のビーズに1種類の一次抗体を結合させます。

（3）抗原をキャプチャーさせた後、ビオチン化二次抗体と反応させ、ストレプトアビジン-PEで蛍光ラベリングします。

（4）フローサイトメトリーの技術を利用し、ビーズを1つずつ検出します。